UJI SENYAWA SITOTOKSISITAS DARI TUMBUHAN AKAR PKI

(Mikania micrantha H.B.K)

 

Emma Susanti, Kamalrullah, Alfian

Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru

 

ABSTRAK

 

Telah dilakukan uji senyawa sitotoksik dari tumbuhan Akar PKI (Mikania micrantha. H.B.K). Metoda yang digunakan adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan larva udang Artemia salina Leach. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa analisa probit pengujian sitotoksisitas ekstrak n-heksan diperoleh nilai LC50 = 2,19 µg/ml, ekstrak etil asetat diperoleh nilai LC50 = 13,49 µg/ml dan pada ekstrak metanol diperoleh nilai LC50= 2,19  µg/ml.

 

Kata kunci : Uji senyawa sitotoksisitas,  Mikania micrantha, HBK.

 

PENDAHULUAN

 

Kanker adalah suatu penyakit yang terjadi akibat pertumbuhan tidak normal dari sel-sel jaringan tubuh, sel-sel yang tidak normal ini (sel kanker) dapat menyebar ke bagian tubuh lainnya sehingga dapat menyebabkan kematian. Upaya membebaskan masyarakat dari penderitaan kanker sangat perlu dilakukan, tetapi ditemui banyak kendala karena biaya pengobatan penyakit kanker yang mahal, serta obat antikanker memiliki efek samping yang besar. Efek samping timbul karena belum adanya obat kanker yang bekerja spesifik. Obat antikanker yang ada sekarang ini selain bekerja pada sel kanker, juga bekerja pada sel-sel yang memiliki petumbuhan yang cepat seperti sel-sel kelamin, rambut dan sebagainya. Oleh sebab itu usaha untuk menemukan obat antikanker terutama yang bekerja spesifik terus dilakukan terutama yang berasal dari bahan alam (Anonim, 2006). Salah satu uji pendahuluan yang dapat dilakukan adalah dengan metoda Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan larva udang laut Artemia salina Leach. Metoda ini merupakan penapisan awal dalam upaya pencarian senyawa antikanker karena hasil dari uji toksisitasnya memiliki korelasi positif dengan aktivitas sitotoksik antikanker (Ayo et al., 2007; Krishnaraju et  al., 2005; Pisutthanan et al., 2004; Lellau et  al., 2003, Meyer et al., 1982).

Secara tradisional beberapa tumbuhan telah digunakan untk mengobati penyakit kanker maupun penyakit infeksi. Beberapa dari tumbuhan tersebut mempunyai potensi untuk dikembangkan menjadi sediaan fitofarmaka dan sebagai sumber senyawa antikanker, antioksidan, antibakteri dan antifungal yang baru. Pencarian sumber obat dari alam sangat memungkinkan di Indonesia yang kaya akan berbagai sumber flora dan fauna. Pemakaian bahan yang bersumber dari ala mini jelas akan memiliki resiko toksisitas yang lebih ringan serta tingkat keamanan yang lebih tinggi dibandingkan dengan obat sintesis yang berasal dari bahan kimia murni.

Salah satu tumbuhan yang dapat dimamfaatkan sebagai pengobatan adalah tumbuhan akar PKI (Mikania micrantha H. B. K). Tumbuhan akar PKI ini merupakan tumbuhan yang merambat pada pohon dan hidup di tempat basah, kadang pada daerah tinggi, hutan dan bantaran sungai. Khasiat tumbuhan ini pada suku Indian dan suku-suku lainnya di Amerika Tengah terutama sebagai anti infeksi dan untuk mengatasi gigitan serangga dan juga sebagai gulma pada tanaman inangnya (Anonim, 2006). Di Riau khususnya pada masyarakat kabupaten Kuantan Singingi Taluk Kuantan tumbuhan akar PKI (Mikania micrantha) ini digunakan untuk mengobati penyakit infeksi. Tumbuhan gulma ini secara empiris digunakan sebagai penanganan penyakit tukak, borok, gatal-gatal, kudis dan penyakit kulit lainnya. Dari penelusuran literature belum banyak penelitian menegnai tumbuhan Mikania micrantha ini. Literatur yang ada hanya membahas penanganan tumbuhan sebagai gulma yang mengganggu tanaman budi daya karena sifat allelopati tumbuhan ini terhadap tanaman lain (Huang, 2009; Zhang, 2002).

Tujuan penelitian ini adalah melakukan uji sitotoksisitas terhadap tumbuhan akar PKI dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality (BSLT) dengan menggunakan larva udang laut Artemia Salina Leach.

 

METODOLOGI

 

Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan adalah kista udang Artemia salina Leach, air laut, metanol, dimetilsulfoksida (DMSO), ekstrak. Ekstraksinya menggunakan pelarut n-Heksan, Etil asetat dan Metanol

 

Alat Penelitian

Seperangkat alat pembiakan larva udang Artemia salina Leach (wadah gelap, aerasi, lampu dengan intensitas cahaya rendah), vial, pipet mikro, timbangan analitik, pipet tetes, kaca pembesar.

 

Jalannya Penelitian

Pada pengujian ini digunakan sampel kering tumbuhan akar PKI (Micania micrantha H.B.K). Sampel dikering anginkan, kemudian dihaluskan dengan blender sehingga didapat serbuk halus. Serbuk halus tersebut ditimbang 1 kg  selanjutnya dimaserasi dengan n-Heksana, Etil asetat dan Metanol selama 3 x 3 hari dalam botol kaca berwarna gelap. Hasil maserasi disaring dan diekstrak sehingga diperoleh ekstrak kental n-Heksana sebanyak 23,04 gr, ekstrak Etil Asetat sebanyak 62,85 gr, ekstrak Metanol sebanyak 97,43 gr.

Kista udang Artemia salina Leach ditetaskan dalam wadah pembiakan yang berisi air laut, dan digunakan setelah 48 jam setelah membentuk larva. Vial uji dikalibrasi sebanyak 5 ml. Pengujian dilakukan dengan konsentrasi 1000, 100, 10 μg/ml dengan pengulangan masing-masing tiga kali. Sebanyak 40 mg ekstak uji dilarutkan dalam 4 ml methanol maka didapat larutan induk ekstrak uji dengan kosentrasi 10.000 mg/ml, kemudian  larutan induk dengan konsentrasi 10.000 mg/ml tersebut dipipet sebanyak 0,5ml  ke dalam vial uji hingga nantinya didapat konsentrasi 1000 mg/ml setelah penambahan air laut hingga 5 ml. Pembuatan  konsentrasi 100 mg/ml dengan cara pengenceran larutan induk 10.000 mg/ml sebanyak 0,5 ml ditambahkan methanol hingga 5 ml maka diperoleh kosentrasi ekstak uji 1000 mg/ml kemudian dipipet sebanyak 0.5 ml  larutan ekstrak uji tersebut ke dalam vial uji hingga nantinya didapat konsentrasi 100 mg/ml setelah penambahan air laut hingga 5 ml. Larutan  konsentrasi 10 mg/ml dibuat dari larutan uji 100 mg/ml dengan cara yang sama. Pelarut etanol pada vial uji dibiarkan menguap. Zat uji dilarutkan kembali dengan 50 ml DMSO, selanjutnya ditambahkan air laut hampir mencapai batas kalibrasi. Masukkan larva udang pada masing-masing vial sebanyak 10 ekor. Tambahkan lagi air laut beberapa tetes hingga batas kalibrasi, kematian larva udang diamati setelah 24 jam. Dari data yang dihasilkan dihitung LC50 dengan  metode kurva menggunakan tabel probit.

Untuk kontrol, 50 ml DMSO dipipet dengan pipet mikro ke dalam vial uji, ditambahkan air laut hampir mencapai batas kalibrasi. Larva Artemia salina Leach 10 ekor dimasukkan lagi air laut beberapa tetes hingga batas kalibrasi. Masing-masing konsentrasi dibuat 3 kali pengulangan (Meyer et al., 1982; Harefa, 1997).

 

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

 

Hasil analisa probit pengujian sitotoksik ekstrak n-heksana diperoleh nilai LC50 =  2,19 µg/ml, etil asetat diperoleh nilai LC50 = 13,49 µg/ml dan Metanol diperoleh nilai LC50 = 2,19 µg/ml.

LC50 adalah konsentrasi yang dapat menyebabkan kematian 50% hewan percobaan, selama waktu tertentu. Pada metoda BSLT, sampel uji dikatakan aktif jika LC50 kecil dari 1000 ppm. Sejauh ini metoda penentuan LC50  ada 3 macam, yaitu Metoda Kurva, Metoda Farmakope Indonesia dan Metoda Finney.

Uji aktivitas sitotoksik dilakukan terhadap larva Artemia salina Leach dengan menggunakan metoda (BSLT). Pemilihan metoda ini sebagai penapisan awal dalam upaya pencarian senyawa antikanker karena biaya percobaan yang murah, proses pengerjaan yang cepat, sederhana, dan tidak diperlukan kondisi yang aseptis. Selain itu, larva Artemia salina Leach memiliki beberapa keunggulan diantaranya mudah didapat, mudah dibiakkan dan dapat hidup pada rentangan salinitas yang tinggi. Larva Artemia salina Leach diperoleh dengan menetaskan telur selama 48 jam. Larva yang telah menetas akan berenang ketempat yang terang. Hal ini akan dapat memudahkan untuk pemisahan dan pengambilan hewan ini  yang telah berkembang menjadi larva.

Masing-masing ekstrak yang akan diuji dibuat dalam kosentrasi 1000, 100, 10 μg/ml dalam air laut. Pembuatan larutan uji menggunakan pelarut organik metanol karena pelarut ini dapat melarutkan hampir semua senyawa dan mudah menguap. Pelarut tersebut pada akhirnya nanti harus dibiarkan sampai menguap sempurna agar tidak mengganggu pada pengujian toksisitas yang dilakukan. Sebelum ditambahkan air laut ke dalam vial yang digunakan sebagai wadah pengujian, terlebih dahulu ditambahkan DMSO (dimetil sulfoksida) untuk dapat membantu kelarutan senyawa uji dalam air laut sehingga senyawa dapat terdistribusi secara merata. Banyaknya DMSO yang ditambahkan adalah 50 µl, karena jika lebih dari 50 µl akan dapat menyebabkan kematian pada larva udang, sifatnya yang tidak terlalu toksik ini menjadi alasan dipilihnya DMSO untuk membantu kelarutan senyawa dalam air laut.

 

Tabel 1.  Hasil uji aktivitas sitotoksik ekstrak-ekstrak Mikania micrantha

No

Ekstrak

Nilai  LC50

1

n-heksana

2,19 µg/ml

2

Etil Asetat

13,49 µg/ml

3

Metanol

2,19 µg/ml

 

 

 

 

 

 

KESIMPULAN

 

Hasil analisa probit pengujian sitotoksik ekstrak n-heksana diperoleh nilai LC50 = 2,19 µg/ml, Etil Asetat diperoleh nilai LC50 = 13,49 µg/ml, sedangkan Metanol diperoleh nilai LC50 = 2,19 µg/ml. Pada hasil yang diperoleh  terlihat bahwa LC50  ekstrak Akar PKI ( Mikania micrantha ) lebih kecil dari 1000 ppm . Pada metoda BSLT, sampel uji dikatakan aktif jika LC50 kecil dari 1000 ppm.

 

 

DAFTAR PUSTAKA

 

Ayo, R.G, J.O. Amupitan, Y. Zhao, 2007, “Cytotoxicity and Antimicrobial Studies of 1,6,8-trihidroxy-3-methyl-antraquinone (emodin) Isolated from the Leaves of Cassia nigricans vahl”, African Journal of Biotechnology, 6(11), 1276-1279.

Anonim, 2006, http/www.issg.org/database/haeringer/violaine/asp?si=18&Fr=1&sts=sss) acced on 18 Nov 2006.

Krishnaraju, A.V, Rao, T.V.N, Sundararaju, D, Vanisree, M, Tsay, H.S, Subbaraju, G.V, 2005, “Assesment of Bioactivity of Indian Medicinal Plant Using Brine Shrimp (Artemia salina) Lethality Assay”, International Journal of Applied Science and Engineering, 3(2), 125-134.

Lellau, T. F, Liebezeit, G, 2003, “Cytotoxic and Antitumor Activities of Ethanolic Extracts of Salt Marsh Plants from the Lower Saxonian Wadden Sea, Southern North Sea” , Pharmaceutical Biologi, 41(4), pp 293-300

Meyer, B, Ferrigni,  N. R,  Putnam L. J. E, Jacobsen, B, Nicholas, D, E and, Laughin J. L. Mc, 1982, “Brine Shrimp: A convenient General Bioassay For Active Plant Constituens”, J. of Medical Plant Medica, 45, 31-34.

Pisutthanan, S, P. Plianbangchang, N. Pisutthanan, S. Ruanruay, O. Muanrit,  2004, “Brine Shrimps Lethality Activity of Thai Medicinal Plants in the Family Meliaceae”, Naresuan University Journal, 12(2), 13-14.